外泌體的主要形成途徑來源于細胞內溶酶體微粒內陷而形成的多囊泡體,再由多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中,從而形成外泌體[4].但外泌體的具體形成機制目前暫未明確,現有的研究認為,不同類型的細胞形成外泌體的過程大致相同,都是由細胞通過內吞作用產生小囊泡,再由小囊泡融合形成早期核內體(early endosome),并逐漸變為晚期核內體(late endosome).隨著胞質內miRVA 酶分子 生長因子 熱休克蛋白等物質的進入,晚期核內體會產生很多小囊泡(intraluminal vesicles,ILVs),并逐漸演變成多泡體(multivesicular body,MVB),這些小囊泡會被釋放到胞外,形成外泌體.
透析胎牛血清的超離制備方式存在一定的爭議.目前主要有三種策略:
1 現將血清與培液按照1:4的比例稀釋,然后超速離心10萬g持續18小時;
2 直接將純血清超速離心10萬g 持續18小時;
3 高離心力下(18萬g)持續3~6小時.
無外泌體血清有4個主要的作用:
1.血清可以提供氨基酸 維生素 無機物 脂類物質等細胞生長必須的基本營養物質;
2.血清可以提供胰島素 腎上腺皮質激素 類固醇激素等各類激素和成纖維細胞生長因子 表皮生長因子 血管內皮細胞生長因子等各類生長因子.除此之外,血清還含有一些微量元素和離子,這些微量元素和離子在代謝解毒過程中起重要作用;
3.血清可以提供結合蛋白,結合蛋白的作用是攜帶重要的低分子量物質,如白蛋白可以攜帶維生素 脂肪以及激素等,轉鐵蛋白可以攜帶鐵.
4.血清在細胞培養過程中可以提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷.