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發布時間：2022/3/25 9:21:20 閱讀次數：294
背景[1-6]
豚鼠血清經無菌采集、批量混合，最終過3次0．1um過濾分裝而成。促細胞生長繁殖的三大指標超過國家標準。本品適合于單抗研制、較常規的原代和傳代細胞培養、規�；囵B的疫苗生產。
豚鼠血清指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營養物質、提供激素和各種生長因子、提供結合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養中的細胞的起到某些保護作用。
標準豚鼠血清（無菌未經滅活）的保存應該注意以下幾點：
(1)需要長期保存的血清必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月.由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發生污染或玻璃瓶凍裂。
(2)熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已完全解凍的血清.加熱過程中須規則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清的質量.補體參與反應有:細胞毒作用,平滑肌細胞收縮,肥大細胞和血小板釋放組胺,增強吞噬作用,促進淋巴細胞和巨噬細胞發生化學趨化和活化。
(3)瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝.在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發生.切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而出現沉淀。
(4)一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌.如發現血清有懸浮物,則可將血清加入培養液內一起過濾,切勿直接過濾血清。
(5)血清中的沉淀物絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質量.可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理.顯微鏡下"小黑點":經過熱處理過的血清,沉淀物的形成會顯著增多.有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認為血清受污染.一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清質量,則應立即停止使用,更換另一批號的血清。
(6)切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會破會而影響血清質量.
用于豚鼠哮喘模型單個核細胞及嗜酸細胞與肺微血管內皮細胞粘附性的研究觀察哮喘豚鼠模型嗜酸細胞和淋巴細胞與肺微血管內皮細胞的粘附率,探討肺微血管內皮細胞在哮喘模型發病中的功能變化及炎癥細胞與其粘附的分子基礎。方法:復制豚鼠哮喘模型;分離、培養和鑒定肺微血管內皮細胞;轉染核因子(NF)-κB反義寡核苷酸;分別用對照組血清和模型組血清孵育;分離外周血淋巴細胞和嗜酸細胞;采用RT-PCR法測定內皮細胞和血管細胞粘附分子-1(VCAM-1)及嗜酸細胞趨化因子(eotaxin)mRNA的表達強度,EMSA法測定內皮細胞NF-κB、活化蛋白(AP-1)的DNA結合活性。
結果:(1)肺微血管內皮細胞在模型組血清刺激下,與兩組外周血淋巴細胞及僅與模型組嗜酸細胞的粘附率顯著升高,內皮細胞與嗜酸細胞兩者的激活,在嗜酸細胞粘附中起明顯的協同作用;(2)肺微血管內皮細胞經模型組血清刺激后,VCAM-1和eotaxin mRNA表達量顯著增多,NF-κB、AP-1的DNA結合活性也顯著升高。結論:肺微血管內皮細胞可被哮喘模型血清激活,使粘附分子、趨化因子及核轉錄因子的合成和分泌增多,從而顯著提高其與炎癥細胞的粘附率,核轉錄因子NF-κB和AP-1對內皮細胞合成炎癥因子可能起調控作用。淋巴細胞與嗜酸細胞的粘附機制不盡相同。
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